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Como realizar os ensaios nas Dáfnias?
Se apenas a colocássemos a Dáfnia na lâmina, ela iria saltar e seria impossível a observação. Para que tal não aconteça utiliza-se fios de algodão e com a ajuda da pipeta transfere-se a Dáfnia para uma lâmina escavada. Para se se realizar as observações microscópicas é necessário proceder do seguinte modo:
Em primeiro lugar, realiza-se uma observação microscópica de uma Dáfnia que não esteja submetida a qualquer solução, ou seja, no seu estado normal. (Para que esta se mantenha num estado normal é necessário que não seja provocado stress, como agitar demasiado a cultura ou transferir constantemente a Dáfnia de um recipiente para outro). Depois de estar na lâmina, foca-se a Dáfnia e identifica-se o coração desta. Marca-se no cronómetro um minuto e inicia-se a contagem dos batimentos cardíacos. Esta contagem realiza-se três vezes com diferentes Dáfnias.
A realização dos ensaios com o álcool 12% e cafeína 30%, soluções fornecidas no Kit Dáfnia I, consiste apenas na aplicação destas soluções, duas a três gotas, na lâmina e ao mesmo tempo retirar o meio de cultura da Dáfnia com papel absorvente. Deixa-se actuar durante cerca de um minuto e, de seguida, conta-se os batimentos cardíacos durante um minuto marcado no cronómetro. Cada solução é testada três vezes e com diferentes Dáfnias. Regista-se todos os valores obtidos em cada ensaio.
Nos ensaios com a solução de Lexotan preparada com uma concentração de 0,92mg/mL, submete-se três Dáfnias a essa solução durante cerca de 24h. Ao fim das 24h, faz-se uma observação microscópica, conta-se os batimentos cardíacos por minuto de cada uma e anota-se os valores. O mesmo procedimento aplica-se à solução de Lanoxin de concentração 0,6mg/mL, mas em vez de deixar as Dáfnias em contacto com a solução 24h, deixa-se apenas trinta minutos.
Para realizar os ensaios com a combinação dos estimulantes e calmantes com álcool, mistura-se num gobelé, em iguais proporções, o álcool 12 % e a solução que se quer estudar com este, agitando para que se forme uma solução homogénea.
Na junção álcool 12 % com a cafeína, apenas se aplica a mistura na Dáfnia e, após cerca de um minuto de actuação, inicia-se a contagem dos batimentos cardíacos por minuto. Procede-se do mesmo modo para a mistura de Lexotan com álcool 12%. Já a fusão do Lanoxin com álcool 12 % necessita de 15 minutos para produzir efeito. Ao fim desses quinze minutos, o processo é o mesmo que foi aplicado nas outras soluções: marca-se um minuto no cronómetro, faz-se a contagem dos batimentos cardíacos e anota-se.
É importante não esquecer que cada solução deve ser testada três vezes, utilizando exactamente a mesma solução em Dáfnias diferentes.
Por fim, depois de anotados todos os valores, faz-se a média dos batimentos cardíacos normais (valor de controlo), que servirá de modelo de comparação. Calcula-se, também, a média de cada um dos ensaios para ser possível uma comparação mais fiável.
Microscópio óptico composto
